Среда для выделения и дифференциации E.Coli O157 | CHROMagar™ O157
Соответствует ГОСТ Р 54354-2011 — Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа
Обычной средой для обнаружения E. coli O157 является Сорбитол МакКонки, у которой очень плохая специфика, как следствие дающая изобилие ложно-положительных результатов (Proteus, E. hermanii, и т.д.). Сорбитол МакКонки трудно читать, потому что есть изменение окраски в случае длительной инкубации. CHROMagar O157 является хромогенной средой с интересной спецификой и очень высокой чувствительностью. CHROMagar O157 очень успешно продается в Японии, где находит свое главное применение в пищевой промышленности.
Чтобы увеличить специфику для обнаружения E.coli O157, можно добавить в эту среду Теллурит.
Артикул (Кат.№) EE222: банка, кол-во порошка для приготовления 5000 мл.
Возможны другие варианты фасовок, пожалуйста, уточняйте.
Хранение
Порошок хранить при температуре 15/30°C. Использовать до даты срока годности, указанной на этикетке.
Состав (г/л)
Агар 15,0; пептон и дрожжевой экстракт 13,0; хромогенная смесь 1,2; pH: 7,0 +/- 0,2
(состав отрегулирован и скорректирован до соответствия рабочим характеристикам).
Инокуляция
Перед инокуляцией довести среду до комнатной температуры. Нанести образец и инкубировать при температуре 37°C 18-24 часа.
Интерпретация
МИКРООРГАНИЗМЫ — внешние признаки колоний
E. coli O157 — розовато-лиловые колонии
Прочие колиформные бактерии — синевато-стальные
Proteus и т.д. — от бесцыетного до серого
ТОЛЬКО ДЛЯ ИН-ВИТРО ДИАГНОСТИКИ.
Для использования обученным персоналом.
Приготовление
Для приготовления определенного количества среды добавить сухой порошок в очищенную воду в соответствующем количестве ИЛИ, развести среду в пропорции 29,2 грамм на литр очищенной воды. Размешать порошок вращательными движениями для разбухания агара. Нагреть и довести до кипения (100°C), при регулярном перемешивании круговыми движениями. НЕ НАГРЕВАТЬ ВЫШЕ 100°С. Смесь также можно довести до кипения в микроволновой печи: после закипания вынуть из печи, аккуратно перемешать, затем поместить обратно в печь, дать быстро вскипеть несколько раз, до получения полностью однородной смеси (зерна агара должны исчезнуть). Кипения должно проходить без вспенивания, крупными пузырями. Охладить на водяной бане до 45-50°C. Тщательно перемешать до образования однородной массы. Разлить в стерильные чашки Петри или пробирки, дать застыть (до консистенции геля) и высохнуть. Хранить в темном месте. Готовые чашки со средой можно хранить при комнатной температуре одни сутки. При температуре 2/8°C – до одного месяца, в темноте, не допуская высыхания.
Примечание 1: если необходимо получить более селективную, и более специфичную среду, добавить раствор теллурит калия и довести до окончательной концентрации 2,5 мг/л при 48°С.
Примечание 2: в случае если образцы продукта содержат высокий уровень Proteus, можно добавить Cefixime при 0,025 мг/л при 48°С.
Примечание 3: в случае если образцы продукта содержат высокий уровень Pseudomonas и/или Aeromonas, можно добавить Cefsulodin при 5 мг/л при 48°С.
Рабочие характеристики и ограничения
Чувствительность для E. coli О157 составляет 98% (Bettelheim et al., 1998). При отсутствии теллурита калия прочие микроорганизмы могут иметь тот же цвет колоний (напр., некоторые виды Salmonella). Подтверждающий латексный тест для E. coli О157 предназначен для выявления сомнительных колоний.
Утилизация отходов
После интерпретации чашки автоклавировать при 121°C в течение минимум 20 минут.
Публикации
Method for enumerating Escherichia coli O157 H7 in compost and aged manure
Prevalence of E.coli O157 H7 in intestinal and Urinary tract infection in children
Outbreak investigation: STEC O157
Isolation of vero cytotoxin-producing Escherichia coli O157 from wild birds